Процедура посева на туберкулезную палочку и анализ мокроты

Посев на туберкулезную палочку осуществляется с целью выявления туберкулеза у пациента. Основным методом диагностики данного заболевания является анализ мокроты, так как он считается наиболее точным. Среди недостатков этого метода можно выделить сроки ожидания результатов. Также для диагностики в качестве материала может использоваться кровь, моча, слизь или кал.

Оценка и учет результатов посева материалов при туберкулезе

Посев

Главной проблемой при диагностике туберкулеза является длительное время ожидания результатов. Это объясняется тем, что отдельные виды МБТ растут очень долго (до трех месяцев). Ввиду этого, посевы содержат в термостате на протяжении всего этого периода.

Колонии МБТ имеют разнообразный размер и вид, развиваются на плотных яичных средах в виде R-форм. Им присущи цвет слоновой кости и морщинистая поверхность (если проводился курс химиотерапии, то поверхность может становиться гладкой). В ходе диагностики используется ряд методик, которые дают возможность отличить МБТ от других видов микобактерий и сапрофитов.

Степень роста микобактерий определяют из числа колониеобразующих единиц в материалах:
  • скудная — если в анализе обнаружено до 20 КОЕ;
  • умеренная — КОЕ более 20, но менее 100;
  • обильная — КОЕ превышает 100.

Для правильной трактовки данных анализа и планирования курса терапии важно не только определить, имеются ли в анализах МБТ. Нужно также определить их популяцию, состав, свойства, объем и ее характер.

Рост микроорганизмов в посеве регистрируют оптическим путем. В процессе своего развития микобактерии потребляют кислород, что приводит к уменьшению его доли в пробирке. Происходит усиление флюоресценции, после чего ее можно наблюдать при облучении, а специальные датчики ее регистрируют. После этого полученная информация вносится в компьютер и сохраняется для последующего анализа кривых роста.

С целью увеличения темпов роста туберкулезных палочек используется специальная среда, основой для которой служит агар с применением газовой смеси и ростовых добавок. Помимо этого используются автоматизированные системы для культивации микобактерий, применение которых способно сократить сроки роста микобактерий до 20 дней.

Пройдите бесплатный онлайн-тест на туберкулез

Этот тест позволит вам определить вероятность того, есть ли у вас туберкулез.

Выращивание чистых культур туберкулезной палочки

Бактерии Выделение микобактерий в искусственных условиях затруднительно. В посеве наблюдается незначительный рост, а сами культуры образуются в течение месяца. Вторичная бактериальная флора, присутствующая в анализе, развивается быстрее, чем микобактерии, вследствие чего развитие микобактерий туберкулеза усложняется.

Туберкулезные палочки неподвижны, спор и капсул не имеют. Их размножение происходит посредством деления и распадения на зерна, из которых в дальнейшем развиваются микобактерии туберкулеза.

Среди основных способов выращивания чистых культур МБТ выделяют:
  • посев материала на специальных яичных средах;
  • обработка патологического материала по методу Гона.

При выращивании по методу Гона используется серная кислота. В пробирку добавляется 10 см3 ее раствора (при концентрации 10-15%), после чего она встряхивается на протяжении 20 минут с целью достижения гомогенизации. Далее пробирка помещается на центрифугу, где находится в течение 5 минут. По окончании процесса центрифугирования оставляют только осадок, который растирается и размазывается тонким слоем без промывания по поверхности заранее подготовленной субстанции яичной среды.

Серная кислота не должна воздействовать на исследуемый образец дольше получаса. В противном случае результаты будут некорректны.

Основой для питательной среды, в которую добавляют посев туберкулезной палочки, являются яйца. Существует несколько вариантов ее изготовления: по методике Виноградова, по методике Любснау и по методике Дорсэ.

Два последних метода отличаются между собой лишь тем, что в первом случае используется и желток, и белок, а во втором — только желток.

В остальном их последовательность одинакова:

Пробирки

  • одна часть глицеринового раствора, концентрацией 5%, добавляется к яйцу;
  • посуда встряхивается до момента достижения гомогенизации;
  • проводится фильтрация полученной среды при помощи марли;
  • полученная жидкость наливается в пробирки по 5 см3;
  • пробирки с жидкостью прогреваются в специальном аппарате.
При проведении приготовлений к посеву, а также при хранении материала следует придерживаться ряда правил:
  1. Вся посуда, используемая при приготовлении, обязательно является стерильной.
  2. Марля, через которую пропускается раствор для фильтрации, также должна быть стерильной.
  3. Хранение материалов осуществляется в чистом, прохладном и темном месте.
  4. Дробное свертывание осуществляется посредством специального аппарата на протяжении трехдневного периода (в течение часа, в первый день при температуре 90 °C, в два последующих — 70 °C).
  5. С целью контроля изучаемая субстанция должна еще три дня находиться в термостате, а его температура устанавливается на уровень 37,5-38 °C.

Анализ мокроты при диагностике туберкулеза

При заболеваниях дыхательной системы для установления диагноза берется мокрота. Ее анализ позволяет выявить наличие в ней микобактерий туберкулеза. Если организм человека находится в здоровом состоянии, то мокрота (секреция слизистой оболочки бронхов) не выделяется.

Общая информация

Мокрота

Начальная стадия заболевания туберкулезом характеризуется выделением незначительного количества мокроты (она имеет слизисто-гнойный характер) или полным ее отсутствием. Кашель пациента сухой и имеет низкую интенсивность.

Опасной разновидностью туберкулеза является кавернозная форма.

Это заболевание сопровождается разрушением кровеносных сосудов в организме человека, а в мокроте часто встречаются:
  • рисовые тельца (линзы Коха);
  • кровь;
  • разнообразные эластичные волокна и кристаллы.

Уровень белка в мокроте при заболевании туберкулезом значительно выше, чем при бронхите.

Если кашель не проходит в течение длительного периода, следует обратиться за помощью к доктору. Не имеет значения, присутствует ли в нем мокрота или нет, потому что туберкулез имеет свойство прогрессировать даже при отсутствии четких симптомов.

Как правильно собирать мокроту

Для более достоверной диагностики следует соблюдать следующие правила, когда мокрота собирается на посев при туберкулезе:

  1. Сбор должен осуществляться в специальный стерильный контейнер, который пациент может получить в лаборатории.
  2. Перед сбором мокроты необходимо прополоскать рот или произвести обработку зубов специальной пастой.
  3. Лучше всего отхаркивание производить утром на голодный желудок. Этот период является оптимальным для сбора, так как выделяется достаточное количество мокроты.
  4. Анализы должны быть доставлены для лабораторных исследований не более чем через два часа после сбора.

Если мокрота была собрана правильно, то она носит слизисто-гнойный или слизистый характер. Ее объем для исследований должен составлять примерно 3-5 мл.

Виды микобактерий туберкулеза

Возбудителем туберкулеза является кислотоустойчивая микобактерия.

Среди основных ее видов выделяются:

Микробактери

  1. Mycobacterium tuberculosis (человеческий вид).
  2. Mycobacterium africanum (промежуточный вид).
  3. Mycobacterium bovis (бычий вид).

Чаще всего туберкулезное заболевание у человека вызывается первым видом (примерно в 92% случаев). На два других вида приходится, соответственно, 5 и 3% случаев.

Тело МБТ имеет форму палочки, а размеры по длине не более 10 мкм при диаметре порядка 0,6 мкм. Туберкулезная палочка не имеет ядра, а основой для нее служит туберкулин, который нейтрализует защитные функции организма человека, направленные на борьбу с ней.

Также этот вид микроорганизмов способен мутировать, чтобы приспособиться к среде обитания. Если микобактерии мутировали, то процесс лечения и выведения из организма усложняется. Клеточная структура и внешняя оболочка уплотняются. Основной особенностью данного вида микроорганизмов является их способность жить и развиваться в разнообразных условиях.

Методы диагностики туберкулеза

Для определения наличия у пациента заболевания туберкулезом используются различные методики, среди которых наибольшее распространение получили:

Врач

  • туберкулинодиагностика;
  • рентгенологические методы (к ним относится флюорография и рентгенография);
  • бактериологический метод;
  • бактериоскопический метод;
  • стратегия DOTS;
  • выявление при обращении к врачу.

При проведении туберкулинодиагностики производится внутрикожное введение туберкулина (реакция Манту). Кожа внутренней поверхности средней трети предплечья обрабатывается спиртовым раствором (концентрация 70%), после чего специальным туберкулиновым шприцом в кожу пациента вводится раствор.

Такой способ выявления туберкулеза часто бывает ложноположительным, поэтому необходимо провести повторный анализ. Однако именно по первичной реакции можно выявить наличие МБТ в организме человека.

На территории России главным методом определения туберкулеза является рентгенология. Все граждане проходят ее как минимум 1 раз в 2 года. Главным преимуществом данного метода является пропускная способность и мобильность. Флюорографическая пленка проявляется, просматривается, а данные по результатам осмотра вносятся в специальные журналы.

Рентгенография в основном проводится после того, как один из методов диагностики дал положительный результат. Кроме того, этот способ эффективен, если врач не может дать четкий ответ, туберкулез у пациента или пневмония. Чаще всего проводится прямая обзорная, боковая или продольная рентгенография.

Основанием для проведения различных диагностик является заключение врача. Поэтому важным методом выявления туберкулеза на ранних стадиях является первичное обращение к доктору (необязательно фтизиатру).

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) постоянно следит за ситуацией в мире по наиболее значимым заболеваниям, к которым относится и туберкулез. Одним из способов борьбы с этим заболеванием является применение стратегии DOTS. Суть ее сводится к проведению коротких курсов химиотерапии, а эффективность составляет не менее 85%. Кроме того, данная методика наиболее экономична.

Проведение бронхоскопии

Бронхоскопия Бронхоскопия — специфический метод исследования, при котором осуществляется осмотр просвета и слизистой оболочки бронхов. Бронхоскопия является эндоскопическим методом исследования и проводится не только с лечебной целью, но и с диагностической.

Эта процедура применяется в том случае, если мокрота не выделяется во время кашля. Она проводится посредством специального оборудования. Бронхоскоп имеет мягкую, подвижную трубочку, диаметр которой составляет от 2 до 6 мм. На ее конце крепится источник света и камера, которая передает изображение на монитор. Аппарат вводится через рот или нос пациента в дыхательные пути, а доктор имеет возможность на экране наблюдать за дыхательными путями больного.

Различают два вида бронхоскопии:
  • ригидная (проводится с применением общей анестезии, поэтому перед началом этой процедуры пациент консультируется у анестезиолога);
  • фибробронхоскопия (применяется местный наркоз).

Бронхоскопия позволяет оценить не только мокроту, взять ее для анализа, но и удалить из органов дыхания. Перед проведением процедуры нельзя употреблять пищу и жидкости не менее 6 часов.

Исследование образца происходит по бактериологическому методу. Это позволяет обнаружить в анализах свидетельства процесса распада легких — микобактерии, кристаллы холестерина, соли кальция и эластичные волокна. Если был выявлен отрицательный посев в результате исследования при туберкулезе, анализ проводится повторно.

Бактериоскопические исследования

Лаборант После сбора диагностического материала, его подготавливают для дальнейших анализов. В основе бак посева лежит реакция микобактерий на фуксин, который преобразует их цвет в красный. Содержимое растирается между стеклами таким образом, чтобы площадь мазка занимала не более 2/3 поверхности. Затем препарат размещается над горелкой, чтобы он окрасился при нагревании.

Анализ позволяет выявить МБТ очень быстро, но только при достаточной концентрации в образце мазка. Необходимо, чтобы концентрация микобактерий на 1 мл мокроты составляла хотя бы 100 тысяч, в ином случае тест может показывать ложноотрицательный результат.

Бактериоскопический анализ обладает повышенной чувствительностью, поэтому пациент должен соблюдать все правила сбора мокроты.

Независимо от вида бактериоскопии, фтизиатр указывает в своем заключении следующие пункты:
  • какие формы МБТ были найдены в мазке;
  • какой вид МБТ присутствовал в мазке;
  • какое количество МБТ было обнаружено в мазке.

Бактериоскопия проводится как минимум три раза, чтобы иметь уверенность в ее результатах. Самыми эффективными способами считается люминесцентная и фазово-контрастная микроскопия.

В основе первой лежит реакция туберкулезной палочки на ультрафиолетовое излучение (благодаря этому, анализ мокроты проходит быстрее). Вторая дает возможность наблюдать микобактерии вживую, что позволяет установить более точный диагноз, однако данная процедура является дорогостоящей.

Диагностика с помощью ПЦР

Лаборатория Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — метод поиска вирусов в организме при помощи генной инженерии, разработанный в 1983 году. Он позволяет не только выявить заболевание, но и обнаружить биологический материал. Из материала больного выделяют фрагменты частиц ДНК вируса, после чего определяют класс микроорганизма.

К плюсам ПЦР относятся:
  • скорость обнаружения вирусов в анализе (всего за 3,5-5,5 часов);
  • высокая точность постановки диагноза даже на начальной стадии развития болезни;
  • для исследования подходит любая биологическая среда, в которой может присутствовать возбудитель;
  • для проведения анализа используется малое количество материала.
Главным минусом такой диагностики является ее цена, поэтому при туберкулезе ее проводят не так часто. ПЦР при туберкулезном заболевании осуществляют только в случаях невозможности поставить точный диагноз иным методом.

Среди прочих минусов этой диагностики отмечается ее неэффективность, если туберкулезная палочка мутировала, а также необходимость правильного выбора диагностического материала для исследования (например, при туберкулезе органов нервной системы нет смысла брать для анализа мокроту). Также после окончания лечения в организме человека будут присутствовать мертвые микобактерии, а ПЦР в таком случае дает ложноположительный результат.

Диагностика с помощью ПЦР при туберкулезном заболевании осуществляется в четыре этапа:
  1. Сбор необходимого материала для исследования (кровь, мокрота и так далее).
  2. Воздействие на диагностический материал с помощью высоких температур для разрушения структуры ДНК.
  3. Снижение температуры во время отжига для образования связи между праймером (часть ДНК, участвующая в биосинтезе) и отделенной на прошлом этапе цепью ДНК.
  4. Биологический синтез молекул.

Достаточное количество копий ДНК микобактерий образуется после 25-30 таких циклов.

Многие люди в последнее время отказываются от прохождения профессиональных осмотров и вакцинации, что повышает риск распространения туберкулезной инфекции среди населения. В таких условиях ПЦР диагностика является ключевым методом, который позволяет выявлять в кратчайшие сроки и наиболее информативно наличие микобактерий туберкулеза в организме.

Можно ли вылечить туберкулез?

Таблетки

Еще несколько лет назад ответом на этот вопрос было однозначное «Да», но особенности микобактерий создают дополнительные сложности при лечении. МБТ мутируют и приспосабливаются к воздействию препаратов, поэтому при диагностике важно точно определить тип микобактерий и их реакцию на воздействие лекарственных средств.

Для полного излечения туберкулеза пациенту необходимо придерживаться ряда условий:
  • четко следовать графику приему препаратов, указанному лечащим врачом;
  • не делать перерывов в курсе лечения даже при ощущении, что туберкулез отступил.

Туберкулез — опасное смертельное заболевание, зачастую носящее латентный характер, поэтому нужно внимательно подходить к процессу лечения. Современные способы лечения и применяемые препараты позволяют справиться с этим недугом.

Тест: Насколько сильно вы подвержены туберкулезу?

Данный тест покажет вам, насколько сильно вы подвержены туберкулезу.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Добавить комментарий

4 × один =

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: